期刊简介
本刊是经原国家科委批准，由中国科协主管、中国药理学会主办的全国性学术性月刊。是国家最有影响的核心期刊和论文评价的文献源期刊之一，影响因子和被引总频次位居全国药学类期刊前列。是国家百种重点期刊、优秀期刊和华东地区最佳期刊。被国际上CA、JA、EM、IG、BA等著名检索系统收录。从1999年起接受中国科协和国家自然科学基金资助，2006—2013年受到中国科协精品期刊工程示范项目资助;2006-2013年因影响因子列药学类期刊第一名获“百种中国杰出学术期刊”称号。主要刊登药理学研究论文。投稿本刊请将论文发到zgylxtb8@163.com并按自动回复办理即可。本刊2012年最新论文查询请见http://c.wanfangdata.com.cn/Periodical-zgylxtb.aspx和http://med.wanfangdata.com.cn/Journal/zgylxtb.aspx”
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首页>中国药理学通报杂志
- 杂志名称：中国药理学通报杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中国药理学会
- 国际刊号：1001-1978
- 国内刊号：34-1086/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：国家期刊奖百种重点期刊（2003，2005）；中国科协精品期刊工程项目资助期刊（2006-2011）；百种中国杰出学术期刊（2006-2013）；中国科技精品期刊（2008，2011连续2届）；RCCSE权威期刊药学类连续三届第一名；影响因子、总被引频次、基金论文比近年来均列我国药学类期刊第一期刊收录：北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 上海图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 哥白尼索引(波兰), 知网收录(中), 文摘与引文数据库, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), CA 化学文摘(美)
食管癌人源噬菌体单链抗体库的构建与初步筛选
段红；李少林；唐树彬；尹晓玲；彭志平
关键词：噬菌体抗体库, 单链抗体, 食管癌, 基因工程抗体
摘要：目的 构建全人源化食管癌噬菌体单链抗体库,从中筛选Eca-109细胞特异性单链抗体.方法 取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源,提取总RNA,用RT-PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库.首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对,以cDNA为模板扩增VH和VL基因片段,再以它们为模板分别扩增VH-linker与VL-linker,用SOE-PCR技术将后者组装成scFv,再引入酶切位点Sfi I和Not I.将scFv基因克隆入噬菌粒载体 pCANTAB-5E后电转入Ecoli TG1,经抗体表达的辅助噬菌体M13KO7超感染,构建单链抗体库.PCR鉴定阳性重组菌Ecoli TG1中scFv的插入率,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定Sfi I和Not I双酶切质粒的结果.从该抗体库中筛选特异性识别Eca109细胞的单链抗体,将阳性克隆菌转化Ecoli HB2151进行可溶性表达.抗体亲和层析纯化后经SDS-PAGE、Western blot鉴定,通过ELISA法、免疫组化法、免疫细胞化学鉴定其与人食管癌细胞的结合的特异性.结果 食管癌周围淋巴结总RNA的提取琼脂糖电泳结果中可见清晰的28 S、18 S条带;VH基因的大小约为450 bp,VL基因为350 bp,组装后的scFv基因约为850 bp.用pUC18标准质粒测定转化效率达到108 cfu·μg-1.scFv的阳性插入率为91.7%(22/24).在筛选过程中,食管癌噬菌体单链抗体得到富集,收获率逐轮得到提高,第4轮为第1轮的141倍;SDS-PAGE与Western blot结果显示抗体分子量为30 ku左右,在Ecoli HB2151中实现了单链抗体的可溶性表达.免疫组织化学结果提示可溶性抗体仅食管癌组织着色,而肝癌、胃癌组织不染色.免疫细胞化学结果表明此可溶性抗体可使食管癌细胞Eca109染色.细胞ELISA测定结果显示可溶性抗体具有较高的特异性,能与Eca109细胞结合,而不与胃癌BGC-823和NHEEC结合.结论 从食管癌病人癌肿周围淋巴结成功地构建人源食管癌噬菌体单链抗体库,并从中筛选到食管癌特异性抗体.
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